Explorarea Metabolismului Proteic

ROLUL PROTEINELOR

Suport plastic pentru tesuturi (keratina, colagen, elastina etc)

Menţinerea echilibrului acido-bazic, prin caracterul de tampon

Intervin in procesul de coagulare (factorii coagularii) si in fibrinoliza (plasminogenul)

Intervin in apararea organismului nespecifica (complementul) si specifica (anticorpi)

Rol de enzime: lipaza, amilaza, tripsina, transaminaze etc

Rol de hormoni: insulina, STH, glucagon, prolactina, renina-angiotensina-aldosteron

ROLUL PROTEINELOR

Transportul unor compusi:

albumina leaga compusi endogeni (bilirubina) sau exogeni (acid acetilsalicilic, lidocaina, diazepam)

prealbumina transporta tiroxina (T4)

transcortina transporta cortizol

transcobalamina transporta vit B12

ceruloplasmina transporta cuprul, transferina transporta fierul

lipoproteinele transporta lipide

Metode de investigare a proteinelor din lichidele biologice (ser, urina, LCR, lichid de punctie)

Metode cantitative

Spectrofotometrie

Refractometrie

Metode calitative

Electroreza proteinelor/electrofocusare geometrica

Imunelectroforeza

Imunodifuziunea Mancini

Reactia Ouchterloni

Refractometria

metodă fizică utilizată pentru determinarea concentraţiei proteice din lichide pe baza indicelui refractrometric

cu ajutorul unui tabel de conversie, in functie de valorile indicilor de refracţie determinaţi, se calculează concentraţia proteinelor din proba analizată

Concentraţia proteinelor, corespuzătoare indicilor de refracţie obţinuţi prin refractometrie la temp de 20°C

Metoda spectrofotometrică la 280 nm

Proteinele absorb radiatia ultravioleta cu lungimea de unda 280nm , absorbtia fiind proportionala cu concentratia proteinelor

Metoda spectrofotometrică la 210 nm

Electroforeza proteinelor

Principiu: la un pH alcalin particulele proteice se incarca cu sarcini negative si migreaza spre anod.

Viteza de migrarea este influentată de:

încarcarea electrica, dependenta de structura primara, marimea si forma particulei

pH-ul solventului

temperatura mediului

vascozitatea mediului

suportul in care se separa

Probele cu continut proteic scazut trebuie concentrate (ultrafiltrare)

Principiul electroforezei

Electroforeza proteinelor

Dezavantajele ultrafiltrarii

Electrofocusarea geometrică

Analiza lichidelor cu concentraţii mici de proteine, fără să mai fie necesară concentrarea prealabilă a probelor

Principiu: concentrarea proteinelor din lichidele analizate în cursul electroforezei, la nivelul unor zone de focalizare ale liniilor de forţă electrică ce traversează gelul de migrare

Principiul electrofocusarii geometrice

Păstrarea condiţiei de tangenţialitate, în condiţiile unor diametre diferite ale cilindrului cu probă gelificată

Fazele de realizare a dispozitivului de electrofocusare geometrică

Montarea cilindrului cu probă gelificată în instalaţia clasică de electroforeză