Cuprins
- 1. STRUCTURA MOLECULARĂ A ACIDULUI DEZOXIROBONUCLEIC (ADN) 3
- 1.1. Structura primară a ADN-ului şi semnificaţia ei genetică 3
- 1 1 1 Semnificaţia genetică a structurii primare a ADN 5
- 1 2 Structura secundară a ADN-ului şi semnificaţia ei genetică 5
- 2 MARKERII MOLECULARI 9
- 2 1 Metode de marcare moleculară bazate pe restricţie enzimatică 11
- 2 1 1 Marcarea RFLP 11
- 2 1 2 Amprentarea genetică bazată pe ADN repetitiv 12
- 2 2 Metode de marcare moleculară bazate pe amplificarea PCR 14
- 2 2 1 Principiul reacţiei PCR 14
- 2 2 2 Markerii RAPD 17
- 2 2 3 Markerii SCAR 19
- 2 2 4 Markerii SSR (microsateliţi) 19
- 2 3 Metode de marcare moleculară bazate pe amplificarea PCR şi restricţie enzimatică 21
- 2 3 1 Markerii CAPS 21
- 2 3 2 Markerii AFLP 22
- 2 4 Aplicaţii 24
- 2 4 1 În ameliorare 24
- 2 4 2 În genetica populatională şi taxonomie 25
- 3 INGINERIA GENETICĂ 33
- 3 1 Tehnologia ADN-ului recombinant 33
- 3 1 1 Transformarea genetică la procariote 33
- 3 2 Secvenţierea ADNului 59
- 3 3 Mutageneza dirijată 62
- 3 4 Transformarea genetică la eucariote 67
- 3 4 1 Transformarea genetică prin metode indirecte 67
- 3 4 2 Transformarea genetică de tip SID (Site Directed Integration) 71
- 3 4 3 Transformarea genetică prin metode directe 72
- 3 4 4 Instabilitatea exprimării transgenelor 74
- 3 5 Realizări privind transformarea genetică a plantelor de cultură 75
- 3 5 1 Ameliorarea rezistenţei la virusuri 76
- 3 5 2 Ameliorarea rezistenţei la bacterii şi ciuperci 78
- 3 5 3 Ameliorarea rezistenţei la atacul dăunătorilor 80
- 3 5 4 Ameliorarea rezistenţei la erbicidele neselective 82
- 3 5 5 Ameliorarea calităţii 83
- 3 5 6 Producerea de noi compuşi 84
- 3 5 7 Ameliorarea rezistenţei la stresul abiotic (stresul osmotic, toxicitatea metalelor grele) 86
- 3 5 8 Manipularea sterilităţii mascule 89
- 3 6 Analiza obiectivă şi legislaţia referitoare la problematica Organismelor Modificate
- Genetic (OMG urilor) 91
- 4 HIBRIDAREA ŞI CIBRIDAREA CELULARĂ 101
- 4 1 Hibridarea celulară 101
- 4 1 1 Obţinerea protoplastelor 101
- 4 1 2 Fuziunea protoplastelor 101
- 4 1 3 Izolarea celulelor hibride 103
- 4 1 4 Regenerarea plantelor hibride 104
- 4 1 5 Confirmarea naturii hibride 105
- 4 1 6 Importanţa hibridării celulare 105
- 4 2 Cibridarea celulară 107
- 5 HAPLOIDIA PRIN ANDRO ŞI GINOGENEZĂ 108
- 5 1 Haploidia prin androgeneză 108
- 5 2 Haploidia prin ginogeneză 108
- 5 3 Importanţa practică a haploidiei 109
- 6 VARIABILITATEA SOMACLONALĂ 111
- 7 BIBLIOGRAFIE 113
Extras din curs
1 Structura moleculară a acidului dezoxirobonucleic (ADN)
1 1 Structura primară a ADN-ului şi semnificaţia ei genetică
Structura primară a ADN-ului este monocatenară, macromoleculară Macromolecula de ADN este de fapt, un heteropolimer alcătuit din mai multe subunităţi elementare numite nucleotide
Un nucleotid este alcătuit dintr-un radical fosforic (P), dezoxiriboză (dR) şi o bază
azotată (N), formula generală a unui nucleotid putând fi reprezentată astfel: P-dR-N
Dezoxiriboza este o glucidă cu cinci atomi de carbon (deci o pentoză), atomi notaţi de la 1' la 5' (fig 8 1) Radicalul fosforic este legat printr-o legătură esterică de atomul de carbon
5' Bazele azotate pot fi purinice şi pirimidinice Bazele azotate purinice sunt: adenina (6- aminopurina) şi guanina (2-amino, 6-oxipurina) având câte un nucleu purinic cu cinci atomi de carbon şi patru atomi de azot, atomi notaţi de la 1 la 9 (fig 1 2)
Figura 1 1: Dezoxiriboza, monozaharidă cu cinci atomi de carbon (pentoză)
Figura 1 2: Bazele azotate purinice
Bazele azotate pirimidinice sunt, de regulă, timina (2,6-dioxi, 5-metilpirimidina) şi citozina (2-oxi, 6-aminopirimidina), având câte un nucleu pirimidinic cu patru atomi de
carbon şi doi de azot, atomi notaţi de la 1 la 6 (fig 1 3)
Figura 1 3: Bazele azotate pirimidinice
Relativ în puţine cazuri în lumea vie pot să apară şi alte tipuri de baze azotate, cum ar fi de pildă 5-hidroximetilcizina sau 6-metiladenina, evidenţiate la unii fagi
Dezoxiriboza realizează legături l'-9 cu bazele azotate purinice şi legături l'-3 cu bazele azotate pirimidinice Dezoxiriboza împreună cu o bază azotată formează un nucleotid Celor patru tipuri de baze azotate le corespund următoarele tipuri de nucleotide: dezoxiadenozina; dezoxiguanozina; dezoxitimidina; dezoxicitidina Aceste nucleotide formează patru tipuri de nucleotide în urma legării radicalului fosforic de atomul de carbon 5' al dezoxiribozei:
- dezoxiadenozin 5'-monofosfat sau acidul dezoxiadenilic (dAMP);
- dezoxiguanozin 5'-monofosfat sau acidul dezoxiguanilic (dGMP);
- dezoxitimidin 5'-monofosfat sau acidul dezoxitimidilic (dTMP);
- dezoxicitidin 5'-monofosfat sau acidul dezoxicitidilic (dCMP)
Două nucleotide sunt legate de un radical fosforic prin legături monofosfodiesterice între atomii de carbon 5' şi 3' a dezoxiribozei aparţinând celor două
nucleotide vecine (Fig 1 4)
Monocatena de ADN este polarizată, în sensul că la unul din capete gruparea OH, aparţinând atomului de carbon 5' este esterificată în timp ce la celălalt capăt gruparea OH, aparţinând atomului de carbon
3' este liberă
Figura 1 4: structura primară a ADN
Preview document
Conținut arhivă zip
- Inginerie Genetica Vegetala.doc