Colesterol oxidaza

1. Momente importante în „istoria” colesterolului

1758 - Dr. Francois Poulletier de La Salle a izolat pentru prima dată molecule de colesterol din

calculi biliari

1838 - Louis Rene Lecanu a identificat pentru prima dată colesterolul în sânge

1927 - Wieland & Adolf Windaus au primit premiul Nobel pentru determinarea structurii

chimice a colesterolului

1955 - John Gorman, fizician la Universitatea din California a separat lipoproteinele în LDL și

HDL. A observat că în plasma oamenilor care au suferit de infarct miocardic se găsește un nivel

crescut de LDL-c

1964 - Dr. Konrad Bloch și Feodor Lynen au primit premul Nobel pentru explicarea sintezei

colesterolului și rolul enzimei HMG CoA reductaza

2. Colesterolul

Colesterolul (C27H46O) este un alcool, având la bază sterol,

identificat în membrana celulară și în țesuturile organismului și

transportat în sânge.

- 80% din celule sunt produse din colesterol

- 2/3 se prezintă sub formă esterificată.

Valori:

Normale: 140-240 mg%

↑Crescute: obstrucții biliare, ciroză portală, hepatite acute, sindrom nefrotic, pancreatită

cronică, hipotireoză, hipercolesterolemie familiară, dislipidemii

↓Scăzute: hepatopatii grave, uremii, stări septice, hipertireoză, boala Tangier, anemii,

macroglobulinemie Waldenstrom, analfalipoproteinemie, stări carențiale

Metoda de determinare: fotometrică/enzimatică

3. Clasificarea colesterolului

Colesterol liber (neesterificat) - HDL

Valori:

Normale: <75 mg%

↑Crescute: obstrucții biliare, ciroză portală, pancreatită acută,

hipercolesterolemie familiară, dislipidemii

↓Scăzute: ca și colesterolul total

Metoda de determinare: fotometrică/enzimatică

Colesterol esterificat - LDL

Valori:

Normale: 60-100 mg%

↑Crescute: ca și colesterolul total

↓Scăzute: ciroză hepatică, stări septice

Metoda de determinare: fotometrică cuplată cu calcul

matematic

4. Metoda enzimatică colorimetrică

Determinarea cantitativă a colesterolului total

Principiu metodei

Colesterol liber + Eseteri de colesterol = Colesterol total

Esteri colesterol + H2O - colesterol esteraza - colesterol liber + acizi grași

Colesterol liber + O2 - colesterol oxidaza - 3-colestenona + H2O2

H2O2 + fenol + 4-aminoantipirina (AAP) - peroxidaza(POD) - chinonimina (roșu)

- Incubare 5 minute la 37șC (stabil 1h)

- Inhibitori: detergenți ionici Hg2+, Ag+

- Se crește la λ = 546nm Es și Ep

- pH optim: 6.5 - 7.0

- Temperatura optima: 35 - 50°C

- pH Stabilitate: pH 5,0 - 10,0

- Stabilitate termică: Sub 35°C

Colesterol total = (Es/Ep)*concentrația standardului (mol/L sau mg/dL)

Transformarea din mg/dL în mmol/L: Mmol/L = mg/dL * 10/M colesterol, Mcolesterol = 286.