Determinarea Vitaminei E din Fitoextracte

INTRODUCERE

VITAMINA E

In anul 1922 Dr. Herbert McLean Evans si Katherine Scott Bishop, anatomisti si fiziopatologi la Universitatea din Berkley au descoperit vitamina E. Efectuarea unor cercetari folosind o dieta semipurificata administrata unor sobolani a determinat observarea urmatorului aspect: femelele sobolan pot ramane gestante, dar fetusii mor in uter, in timp ce adaosul de salata verde proaspata sau germeni de grau la dieta semipurificata a determinat aparitia unor pui sanatosi. In mod evident, in salata verde si in germenii de grau exista un nutrient care nu era prezent si in dieta semi-purificata. Acest nutrient a fost denumit Factorul X , iar in 1924 numele i-a fost schimbat in vitamina E (tocoferolul, din grecescul toco – nastere).

Vitamina E a fost izolata abia in 1936, tot de catre Dr. Evans si colaboratorii, in timp ce in 1938 Dr. E Fernholz descopera structura chimica a tocoferolului.

Cercetarile sunt continuate de catre laureatul premiului Nobel pentru chimie, Paul Karrer, care sintetizeaza vitamina E. Abia in 1958 toti cei 8 compusi chimici care alcatuiesc familia denumita generic vitamina E sunt descoperiti.

In anul 1956 Dr. Harmann lanseaza teoria radicalilor liberi (radicalii liberi sunt produsi de metabolism celular) care stau la baza procesului de imbatrinire. Teoria lui Harmann este simpla si eleganta: acesti radicali liberi reactioneaza cu ADN-ul si alti constituenti celulari, lezandu-i. Dr. Harmann a observat ca nutrientii antioxidanti precum vitamina C si E pot neutraliza radicalii liberi.

CE FACE?

Vitamina E este un puternic antioxidant, protejand tesuturile si grasimile din organism de actiunile radicalilor liberi. Radicalii liberi sunt incriminati in aparitia bolilor cardiovasculare si cancerului.

Joaca un rol important in functionarea adecvata a sistemului imun, repararea ADN-ului si procesul de respiratie celulara.

Observatie: Radicalii liber lezeaza foarte usor grasimile. Membrana celulara este constituita din grasimi si este foarte vulnerabila la actiunea oxidativa radicalilor liberi. Vitamina E are un rol cheie in interceptarea acestor radicali liberi si impiedicarea unui intreg lant de reactii distructive pentru grasimi. Alte molecule protejate de vitamina E sunt lipoproteinele, substante care transporta grasimile prin fluxul sanguin. Dintre acestea, lipoproteinele cu densitate joasa (LDL), transporta colesterolul de la ficat in restul organismului. S-a constatat ca aceste molecule pot fi oxidate de catre radicalii liberi, LDL-ul oxidat fiind unul dintre factorii mentionati in aparitia bolilor cardiovasculare.

SURSE NATURALE

Vitamina E este o vitamina liposolubila (alaturi de vitamina A, D si K) care grupeaza 8 compusi chimici: 4 tocoferoli si 4 tocotrienoli, notati in cadrul fiecarei subgrupe cu literele grecesti alfa, beta, gama si delta. Acesti compusi se gasesc in diferite proportii atat in natura, cat si organismul uman, iar alfa-tocoferolul a fost cel mai intens studiat, proportia lui in organism fiind de altfel mult mai mare decat a celorlalti compusi si considerandu-se astfel forma cea mai activa a vitaminei E.

Sursele naturale ale vitaminei E sunt: uleiurile vegetale (de floarea soarelui, porumb, soia,. masline), nucile, alunele, migdalele, semintele de floarea soarelui, germenii de grau, legumele cu frunze verzi (broccoli, spanac). Cele mai bogate surse sunt uleiurile vegetale. Comparativ, uleiul de floarea soarelui contine 55,8 mg vitamina E/100 g fata de uleiul de masline cu 12 mg/100 g sau uleiul din germeni de grau 215,4 mg/ 100 g.

DACA LIPSESTE

Lipsa vitaminei E determina fragilitate membranara la nivelul hematiilor(celulele rosii ale sangelui), cu oxidarea si distrugerea hematiilor. Carenta de zinc poate determina la randul ei un nivel scazut de vitamina E.

Manifestarile deficitului de vitamina E sunt:

• Tulburari neurologice la nivelul mainilor si picioarelor (durere, parestezii sau intepaturi, anestezie), ca urmare a unei transmiteri defectuoase a impulsului nervos

• Paloare tegumentara secundara anemiei

• Tulburari de vedere, iritabilitate

• Tulburari de concentrare, oboseala

• Infectii mai frecvente

• Ca urmare a malabsorbtiei grasimilor, pacientii prezinta scaune grasoase si diaree cronica

O serie de studii preliminare au sugerat ca vitamina E ar putea preveni sau intarzia instalarea bolilor cardiace coronariene, insa studiile controlate, pe populatii largi nu au demonstrat acest aspect. Se pare ca aceasta lipsa a rezultatelor directe ar putea fi explicata de studierea doar anumitor forme de vitamina E (in speta alfa-tocoferolul), nu toate formele prezentand acelasi rol. Studii recente indica faptul ca alfa-tocoferolul nu ar avea nici un rol in inhibarea proliferarii celuleor neoplazice prostatice, in schimb gama-tocoferolul si delta-tocoferolul au rol anti-cancerigen.

Un alt studiu observational arata ca vitamina E combinata cu vitamina C a determinat o intarziere a debutului bolii Alzheimer cu 64 – 78 %. Si in acest caz cercetatorii iau in considerare alte forme de tocoferol si nu alfa-tocoferolul.

DETERMINAREA CONTINUTULUI DE VITAMINA E.

METODA PRIN CROMATOGRAFIE DE LICHIDE

DE INALTA PERFORMANTA

NUTRETURI

Domeniu de aplicare

Acest standard international stabileste metoda de determinare a continutului de vitamina E (DL-α-tocoferol) din nutreturi si alimente pentru animale de casa prin cromatografie de lichide de inalta perfor-manta.

Principiul metodei

Saponificarea probei cu solutie de hidroxid de potasiu si extractia vitaminei E in eter de petrol. Indepartarea eterului de petrol prin evaporare si dizolvarea reziduului in hexan. Determinarea concentratiei de vitamina E a extractului in hexan prin cromatografie de lichide cu faze normale, in conditii de lucru in care se separa DL-α-tocoferolul de ceilalti tocoferoli.

Reactivi

Se folosesc numai reactivi de puritate analitica

• Apa, care sa corespunda cel putin calitatii de puritate 3 conform ISO 3696.

• Solutie de hidroxid de potasiu. Se dizolva 500 g hidroxid de potasiu in apa si se dilueaza la 1 litru.

• Etanol, w(C2H5OH) = 95 % (raport volumetric) sau alcool industrial metilat, echivalent.

• Hexan, de puritate HPLC.

• Eter de petrol, punct de fierbere intre 400C pana la 600C, reziduul la evaporare trebuie sa fie mai mic de 20mg/l

• Vitamina E, substanta etalon: DL-α-tocoferol, puritate minima 96,0 %. Puritatea etalonului se verifica spectrofotometric.

• 1,4 – Dioxan, de puritate HPLC

• Sulfat de sodium (Na2SO4), anhidru.

• Solutie de ascorbat de sodium, ρ = 100g/l

• Gaz inert, exemplu azot.

• Faza mobila pentru cromatografia de lichide.

Se amesteca 30 ml 1,4-dioxan cu 970 ml hexan. Se titreaza printr-o membrane filtranta inainte de folosire.

• Etanol, w(C2H5OH) = 96 % (raport volumetric)

• Metanol (CH3OH), calitate HPLC