Compuși Bioactivi

1.Introducere

Polifenolii sunt substanțe antioxidante care se găsesc in cantități apreciabile în produsele vegetale.

Studiile epidemiologice și clinice au scos în evidență faptul că acțiunile oxidative sunt implicate în etilogia a numeroase boli cerebrale și cardiovasculare. Deși organismul uman dispune de sisteme de apărare împotriva stresului oxidativ, capacitatea acestor sisteme de protecție scade cu înaintarea în vârstă ceea ce face necesară suplimentarea dietei cu factori antioxidanți fitochimici. Poporul francez include in dieta lui zilnică un pahar de vin roșu ceea ce face ca incidența accidentelor cardiovasculare să scadă de aproximativ 2,5 ori. Analiza compoziției chimice a vinului a demonstrat că acesta conține peste 1000 de compuși benefici pentru organism. Printre cele mai importante sunt fenolii, glucidele, substanțe minerale (K+, Ca2+, Mg2+), vitamine (A, B2, B5, B6, C), acizi organici, compuși aromatici și proteine. Fenolii se găsesc într-o cantitate mai mare în vinurile roșii (3 5 g/L) decât în cele albe. Datorită acțiunii antioxidabte, fenolii din vin anihilează acțiunea negativă a radicalilor liberi, stopând astfel îmbătrânirea precoce și bolile degenerative.

Protecția antioxidantă a vinurilor este asigurată de SO2 care este acceptat și folosit în toate țările datorită acțiunilor sale multiple, printre care amintim: acțiune antiseptică, acțiunea de inhibiție și blocare a activității complexelor enzimatice oxidative (polifenoxidaza, peroxidaza, ascorbicoxidaza). SO2 are ca acțiune și reducerea valorii pH-ului ceea ce ușurează solubilitatea antocianilor, aplicarea tratamentelor stabilizatoare și creșterea capacității antimicrobiene.

Conținutul în fenoli ale diferitelor vinuri se determină cu reactivul Folin-Ciocalteu.

2.Principiul metodei:

Polifenolii sunt din punct de vedere chimic compuși aromatici cu una sau mai multe grupări hidroxil substituite la nucelul aromatic, care le conferă proprietăți redox. Metoda are la bază transferul de electroni produs în mediul alcalin cu reucerea complexului acid fosfomolibdenic/ fosfovolframic. Deci, grupările hidroxil ale compușii polifenolici sunt oxidate de reactivul Folin Ciocalteu cu formarea unui compus colorat albastru cu absorbție maximă la λ = 760 nm.

3.Materiale necesare:

- acid galic

- apa mili-Q

- reactiv Folin Ciocalteu

- Na2CO3 2%

4.Prepararea solutiilor de lucru:

Na2CO3 2% - se cântărește 2 g Na2CO3 se aduce la semn cu apa mili-Q într-un balon cotat de 100 cm3.

Soluția stoc de acid galic 2 mg/mL se realizează într-un balon cotat de 50 cm3. Concentrațiile utilizate pentru realizarea curbei etalon.

Concentratia de acid galic mg/mL Volumul de acid galic 2mg/mL

mL Volumul de apa mili-Q

mL

0.025 0.0125 0.9875

0.05 0.025 0.975

0.12 0.06 0.94

0.25 0.125 0.875

1.0 0.5 0.5

1.5 0.75 0.25

5.Modul de lucru

a. Micrometoda

1. într-un tub Eppendorf se adaugă 0.6 mL apă mili-Q, 10 µL probă sau standard, 50 µL reactiv Folin-Ciocalteu

2. agitare

3. repaus 1 min

4. se adaugă 0.15 mL Na2CO3 2%

5. se adaugă 0.19 mL apă mili-Q

6. se tine la intuneric, 200C, 2h. Culoarea variaza intre galben si albastru inchis.

7. citire absorbanță la λ = 760 nm

b. Macrometoda

1. într-o eprubetă se adaugă 6 mL apă mili-Q, 0.1 mL probă sau standard, 0.5 mL reactiv Folin-Ciocalteu

2. agitare

3. repaus 1 min

4. se adaugă 1.5 mL Na2CO3 2%

5. se adaugă 1.9 mL apă mili-Q

6. se tine la intuneric, 200C, 2h

7. citire absorbanță la λ = 760 nm