Extras din curs
Tehnologia ADN recombinant (clonare genica) asigura transferul de material genetic de la o specie la alta, mai mult sau mai putin indepartata filogenetic.
Un sistem clonator de gene are 5 componente:
AND pasager (exogen, heterolog) ce urmeaza a fi transferat in celula gazda si care contine gena sau genele de interes; are greutate moleculara mica;
Vectorul sau vehiculul care transfera genele, le multiplica si le mentine in celula gazda. Poate fi:
plasmid,
bacteriofag l sau derivati ai acestuia,
alte virusuri,
cosmid (plasmid + situsul cos de la fagul l),
fagimid (plasmid + ADN de la fagi filamentosi).
Endonucleaze de restrictie care “taie” in situsuri specifice si formeaza capete adezive (coezive sau lipicioase) sau netede;
AND-ligaze ce catalizeaza legarea covalenta a ADN-ului pasager la vector;
Celula gazda (E. coli, S. cerevisiae, alte celule: vegetale sau animale)
Etapele principale ale unei experiente de transfer de gene:
Obtinerea fragmentelor de ADN pasager (heterolog) prin PCR sau reverstranscriere;
Obtinerea ADN vector (de regula sunt comercializati);
Insertia pasagerului in vector cu ajutorul unor ligaze specifice și obtinerea moleculelor de ADN hibride (recombinante);
Introducerea ADN recombinant (hibrid) in celula gazda (prin unul din mecanismele: conjugare, transductie, transfectie);
Selectia, contraselectia si caracterizarea recombinantilor;
Exprimarea moleculelor de ADN clonate in celula gazda.
Conținut arhivă zip
- Principii de Genetica.ppt